Fluoreszenz Lifetime Imaging - Theorie und Funktion

Worum geht's

Du lernst die theoretischen Grundlagen und praktische Anwendung der Fluorescence Lifetime Imaging (FLIM) an konfokalen Laser-Scanning-Mikroskopen. Am Ende kannst du Lifetimes messen und interpretieren, FRET- und Anisotropie-Analysen planen sowie geeignete Protein‑Fluorophor‑Konstrukte für FRET auswählen und einfache Messungen am kombinierten LSM/FLIM‑System selbstständig durchführen.

Was du danach kannst

• Verständnis der Entstehung von Fluorophor-Decay‑Kurven
• Erkennen und Interpretieren von Lifetimes in unterschiedlichen zellulären Kontexten
• Anwenden von FLIM zur Untersuchung von Protein‑Protein‑Interaktionen (FRET)
• Auswahl geeigneter Protein‑Fluorophor‑Fusionskonstrukte für FRET
• Erkennung von HomoFRET-bedingten Anisotropie-Änderungen zur Detektion von Clustern
• Analyse des Diffusionsverhaltens von Proteinen (z. B. Membranproteine) mittels FCS
• Bedienen eines kombinierten, gepulstlaserbasierten Lifetime‑Messsystems gekoppelt an ein konfokales LSM

Aus was das Modul besteht

• Übung/PraktikumPraktische Handhabung der FLIM/Anisotropie-Messeinheit am konfokalen LSM; Studierende sollen Geräte für einfache Arbeiten selbstständig bedienen können
• Theorie-SitzungenErarbeitung der theoretischen Grundlagen (Decay‑Kurven, FRET, Anisotropie, FCS) anhand ausgewählter Literatur

Lehrmethode

• LiteraturarbeitVorbereitung der theoretischen Grundlagen anhand ausgegebener bzw. verfügbarer Texte
• Praktische Übungen am GerätVerfestigung der Theorie durch direkte Anwendung am kombinierten Lifetime‑Messgerät und konfokalen LSM
• Vorträge/SkriptenVermittlung von Hintergrundwissen und Anleitung zur praktischen Arbeit